许秋这做法,似乎有点不对啊!
常规的抗体提取与纯化办法,是使用proteing柱粗提血清总Igg。
这个过程中,抗体亚型分选和聚合体去除其实只能省略。
毕竟这一操作太过繁琐,而且也不是这么简单就能完成分选与去除的。
然而,许秋的方法却截然不同。
段善继甚至看得有些迷糊了。
“你这……做的是什么?”
良久,段善继终于是按捺不住好奇心,咽了下口水后问道。
许秋手中的操作继续。
口里也同步给出了解说:“段教授平日里做的,应该是利用proteing柱粗提血清总Igg吧?”
段善继手指颤抖了一下。
听许秋这语气,似乎是要给自己上课了?!
这不对吧?
而一旁的邱伟、张骁等人也是瞪大了眼睛。
等等,不是……这生了什么!
段教授竟然看不懂许秋的操作目的?
这怎么可能!
众多研究所内的科研人员也赶紧看向操作区。
然而,他们也被许秋那令人眼花缭乱的动作给整晕了,同样是一头的雾水。
事实上,段善继能认出许秋的操作细节,但,却不明白操作目的。
因而此时倒也按下了内心的些许不悦,道:“的确,proteing柱粗提血清总Igg是常规手法,你难道有什么创新不成?”
许秋没有回答这个问题。
而是转而提起proteing柱粗提法的缺陷,道:“通过传统粗提取提纯出来的总Igg中含有大量非特异性抗体,比如抗食物蛋白抗体,这会直接导致后续交叉反应实验假阳性,导致实验者的严重误判。
“此外,未能够去除的Igg聚合体可能通过空间位阻掩盖真实结合位点。
“再者就是,这种情况下,我们没法验证抗体功能活性。即便是部分变性Igg丧失结合能力,我们也没法觉。”
简单来说,就是三点。
一个是不够纯,会导致实验结果不精准。
另一个,是太多影响结合的因素,即便是嗜沫凝聚杆菌与血清结合了,也可能会被遮挡住,难以察觉。
而最后一点,就是实验中出了什么问题导致Igg失效甚至是死亡,也没法判断到底是“不结合”,还是“抗体失效”。
这些因素导致的结果是,即便是一路做下来了,最终的eLIsa信号也可能来自非目标抗体,误判交叉反应存在!